转化的基本思路都是通过外来干预（化合物、电）来使得细菌转化为感受态细菌，这样外来DNA就可以进入到细胞内部，除去外来干预后细胞恢复。

　　在载体DNA分子上组装一些选择标记基因通过表达来显示特定性状来作为筛选依据。即需要有筛选标记：蓝白斑或抗生素

　　合成生物学基于系统生物学的遗传工程和工程方法的生物系统的研究，从基因片段、DNA分子、基因调控网络与信号传导路径到细胞的人工设计与合成，将工程学原理应用于遗传工程与细胞工程等领域，与合成生物学、计算生物学与化学生物学一同构建起系统生物学的基础

　　②不同点：操作过程不同：一个是单个基因层面上，一个是多个基因线路和网络上，可以认为合成生物学是基因工程的集成结果

　　三. 遗传学方法与技术：1. 基本概念：① 基因型：特定基因座上的等位基因② 表现型：由基因型所表达，显现出遗传性状

　　物理诱变（射线诱变）破坏DNA链（DNA有修复供能），但是通过射线打断的链程度较大，难以修复或者修复出错从而出现诱变。有点突变、无端片段插入、片段缺失（indel、insertion、deletion）

　　化学诱变 ：可以和基因直接反应来实现诱变（点突变）化学诱变没有改变基因序列（修饰完之后作为模板进行复制，可以实现G-A点突变的发生过）

　　转座子诱变：跳跃基因（基因出现跳跃的时候会影响其他基因，从而引发诱变，导致密码子乱掉） 优点：我们可以更好的map与鉴定转座子，定位找到周围的基因（测序），然后确定类型

　　传统性打靶：自发的（千分之一的概率，生成后把其他杀掉，然后增值就可以把实现富集提高效率（概念上可行、实践上也可行））、同源重组（同源序列碰到同源基因==可能发生同源重组（在DNA断裂的情况下—依赖于DNA链的断链以及修复）

　　新型基因打靶技术：DNA链断裂与修复：考虑使用什么样的核酸内切酶（剪刀）以及托运问题（要能够识别DNA的序列---DNA复制与转录---转录因子来作为识别因子）

　　缺点：ZFN耗时耗力，On-Target效率不够高，Off-Target效率不够低，不能对任意靶点

　　用途：是为了在遗传操作的过程中保留隐形突变基因，避免发生重组。平衡致死系可以减少平衡子的污染，保证了连锁的严谨性

　　原理：导入不为致死基因的B【B等位基因是显性基因】，然后将a，B位点位于同一染色体上实现遗传连锁。从而使a一直保留下去。其中B称为平衡子

　　作用机制：在转录后水平抑制基因表达-----通过序列互补结合下游mRNA从而抑制翻译或者降解。

　　应用：植物育种、动物基因定位、动物肿瘤免疫、单克隆抗体【疾病诊断、化学钝化、抗肿瘤、免疫】

　　结构上：先固定骨架-----再找氨基酸组合；不固定骨架-----不断优化次序----最低自由能

　　脱靶效应---降低方法：引入Cas9缺口酶从而靶向双链断裂的方法；将Cas9和Fokl核酸酶的融合

　　① 产生过程：细胞去极化—钠离子通道激活—钠离子进入细胞—钠离子通道打开—钠离子流出细胞外② 特点：有无（阈值）、跳跃传播、无衰减、不应期（通道失活）

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