为了获得更全面和真实的科学理解，体外分子水平的研究需要与细胞学的体内研究结合起来。特别是在免疫学研究中，细胞学实验的重要性日渐增强，这些实验包括研究细胞形态、功能及细胞间相互作用等方面。传统方法，如在特定时间点采用固定染色和显微镜拍照来观察细胞变化，或通过流式细胞术、酶联免疫吸附试（ELISA）、聚合酶链反应（PCR）等终点法来检测细胞的免疫反应，往往不能涵盖活细胞状态的观察。

　　实现活细胞状态随时间变化的实时动态监测无疑会大大增强研究的深度和广度。赛多利斯Incucyte实时活细胞分析系统是赛多利斯生物分析工具中的一个重要组成部分。该系统可以直接安装于细胞培养箱内，允许研究人员在不干扰细胞培养环境的情况下，对活细胞的行为进行实时、连续且动态的监测，监测周期可长达数周。通过这种方式，不仅可以获得生长曲线等关键数据，还能生成相关的图像和视频资料。这种方法特别适合于免疫学等领域中的细胞学实验，为研究提供了前所未有的便利性和洞察力。

　　免疫学与细胞生物学研究中常见的细胞实验有十种，这些实验构成了免疫学和细胞生物学研究的基石，分为三大类别：①基础研究：细胞增殖、免疫分型、免疫细胞激活与分化、细胞健康和凋亡，细胞侵袭实验等，②细胞功能：免疫细胞杀伤、吞噬与清除作用、NETosis等，③药效评价：趋化/迁移、抗体内化、病毒感染等

　　利用赛多利斯的Incucyte实时活细胞分析系统可以轻松实现以上这些应用与分析，接下来将为大家介绍其中五个应用进行讲解，分别是：细胞增殖及计数、细胞鉴定和免疫分型、细胞激活和分化、细胞健康和凋亡、免疫细胞杀伤（细胞溶解）。

　　与传统的“终点法”相比，Incucyte实时活细胞分析系统提供了一种更高效的方法来获得细胞增殖及计数结果（表1），并提供灵活且便捷的实验方案（图1）。该系统支持直接进行无标记的细胞汇合度分析，同时，通过Incucyte实时活细胞分析系统的 Cell-by-Cell Analysis软件，可以实现无标记的细胞计数。该技术能够根据面积尺寸、形状及荧光强度等指标，在单个细胞水平上自动分析和计算视野中所有细胞，从而生成生长曲线等数据结果。

　　荧光标记的CD抗体（Abs）广泛应用于流式细胞术，以实现细胞识别和免疫分型，已成功描述至少15种人类T细胞亚型（如CD4+，CD8+等）。Incucyte实时活细胞分析系统采用了类似的原理，对标记方法进行了改进：

　　将抗CD抗体结合到同型匹配的带有荧光标签的Fc区域靶向Fab片段，便可通过简单的一步混合来完成标记。在检测中使用一种非干扰性的背景荧光抑制染料，以改善488 nm的荧光信号，保护细胞的同时提供更灵活的分析方案。

　　免疫细胞的分化和激活是免疫力和免疫应答的关键步骤。细胞通过受体信号传导进行扩增并产生功能效应，最终导致基因表达、分化和表型变化。Incucyte实时活细胞分析系统能够更清晰、更深入地研究这个过程的复杂性和动态性：

　　细胞健康和细胞凋亡的测量对于研究药物、培养条件或基因改造对细胞生长或活力的影响至关重要。 赛多利斯Incucyte实时活细胞分析系统通过使用专为活细胞分析而优化的荧光染料，提供了一种非干扰的、“即混即读”分析方式对细胞凋亡、细胞死亡的时间过程以及它们与细胞增殖的关系的洞察。

　　Caspase 3/7染料在存在活性caspase的作用下发出荧光，可检测长期和短期效应；Annexin V染料与细胞膜外侧的磷脂酰丝氨酸结合检测早期凋亡，细胞非通透性的DNA结合荧光探针则可用于检测细胞膜的完整性。该方法适用于贴壁细胞及非贴壁细胞，并且，无需将细胞从培养箱中取出即可分析细胞健康和活力，保护细胞、节约时间、提高质量。

　　细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）、自然杀伤细胞（NK）和某些中性粒细胞能够杀死被感染的或恶性细胞。对于细胞杀伤的检测，可通过检测垂死的目标细胞中的释放的Cr-51和细胞酶（如LDH）等来实现。但这些传统方法存在诸多弊端，例如放射性。而检测技术的关键挑战在于：

　　赛多利斯Incucyte实时活细胞分析系统有效应对细胞分析中的常见挑战，无需移除细胞、使用同位素或进行抗体标记，也不需要进行清洗步骤。通过实时和连续的成像技术，该系统能够捕捉细胞随时间变化的详细信息。一个简便的方法是使用荧光蛋白（如RFP）来标记目标细胞，并在细胞裂解时监测荧光的减少。此外，还可以直接使用annexin V或caspase 3/7来测定目标细胞的凋亡。这些技术对于评估检查点、CAR-T细胞治疗、双特异性抗体以及其他免疫疗法的表型效应极为重要，展示了赛多利斯Incucyte实时活细胞分析系统在免疫疗法研究中的应用价值。

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